Ensayo de extremidades recombinantes para comprender la morfogénesis, el modelado y los primeros pasos de la diferenciación celular

Comprender los primeros pasos de la diferenciación celular es esencial para conocer otros procesos complejos como la morfogénesis. Así, las extremidades de pollo recombinantes son un modelo experimental que permite estudiar la diferenciación celular y la generación de patrones bajo señales de patrón embrionario.

Este modelo experimental imita un entorno in vivo; ensambla células reagregadas en una cubierta ectodérmica obtenida de una yema de extremidad temprana. Posteriormente, los ectodermos se transfieren y se implantan en un embrión receptor de pollo para permitir su desarrollo joplink Recombinant Human C5a anaphylatoxin. Este ensayo se utilizó principalmente para evaluar las células mesodérmicas de la yema del miembro; sin embargo, puede aplicarse a otras células madre o progenitoras de otros organismos.

Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
E22-HC180.48
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
E22-HC180.96

Eventos epigenómicos y estructurales impiden la recombinación en Brassica napus

La recombinación meiótica es un importante proceso evolutivo que genera diversidad genética en cada generación en los organismos sexuales. Sin embargo, este proceso está muy regulado y la mayoría de los cruces se producen en las regiones cromosómicas distales que albergan bajos niveles de metilación del ADN. Incluso en estas regiones permanecen algunas islas sin recombinación, cuyas causas subyacentes investigamos. -Se establecieron mapas genéticos en dos híbridos de Brassica napus para detectar la presencia de esas grandes islas no recombinantes.

  • El papel desempeñado por la metilación del ADN y las variaciones estructurales en esta ausencia local de recombinación se determinó mediante la realización de BS-seq y comparaciones de todo el genoma. Las variaciones estructurales inferidas se validaron mediante mapeo óptico u oligo-FISH.
  • Las regiones hipermetiladas o invertidas entre genomas de Brassica se asociaron con la ausencia de recombinación. Las comparaciones por pares de nueve ensamblajes genómicos de B. napus revelaron que tales inversiones ocurren con frecuencia y pueden contener genes agronómicos clave como la resistencia a estreses bióticos.
  • Concluimos que tales islas sin recombinación pueden tener distintos orígenes, como la metilación del ADN o variaciones estructurales en B. napus. Por tanto, es esencial tener en cuenta estas características en los programas de mejora genética, ya que pueden dificultar la combinación eficiente de alelos favorables en variedades de élite.
T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-25g Abbexa
T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-5g Abbexa
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio
T7 DNA
310-005 GeneOn
T7 DNA
310-025 GeneOn

Producción de proteínas recombinantes y purificación de proteínas insolubles

Las proteínas se sintetizan en sistemas heterólogos debido a la imposibilidad de obtener rendimientos satisfactorios a partir de fuentes naturales. La producción eficiente de proteínas recombinantes solubles y funcionales es uno de los principales objetivos en el campo de la biotecnología. En este contexto, es importante señalar que, en condiciones de estrés, la maquinaria de plegamiento proteico se satura, lo que favorece el mal plegamiento de las proteínas y, en consecuencia, su agregación.
Así pues, la selección del organismo de expresión óptimo y de sus condiciones de crecimiento para minimizar la formación de agregados proteicos insolubles debe hacerse en función de las características de la proteína y de los requisitos posteriores. Escherichia coli es el sistema de expresión de proteínas recombinantes más popular, a pesar del gran desarrollo alcanzado hasta ahora por los sistemas de expresión eucariotas.

Protein A protein
Fitzgerald
Protein L Protein
Abbexa
Protein L Protein
Abbexa

Además, otros sistemas de expresión procariotas, como las bacterias lácticas y las bacterias psicrófilas, están ganando interés en este campo.
Sin embargo, cabe mencionar que el sistema de expresión procariota plantea, en muchos casos, severas restricciones para el éxito de la producción de proteínas heterólogas. Por ello, los sistemas eucariotas, como las células de mamíferos, insectos, levaduras, hongos filamentosos y microalgas, constituyen una alternativa interesante para la producción de estas proteínas difíciles de expresar.

Paraffin Wax
Toronto Research Chemicals
Paraffin wax pellets
EWC Diagnostics
Paraffin wax pellets
EWC Diagnostics
Paraffin wax Pellets
EWC Diagnostics
Paraffin wax Pellets
EWC Diagnostics

Un nuevo y potente portador para la exportación no convencional de proteínas en Ustilago maydis

Las proteínas recombinantes están omnipresentes en campos como la investigación, la farmacia, el diagnóstico o la industria química. Para disponer de toda la gama de proteínas útiles, es necesario crear nuevos huéspedes de expresión de proteínas que no se producen suficientemente en los organismos de la plataforma estándar. La secreción no convencional en el modelo fúngico Ustilago maydis es una opción novedosa y atractiva para la exportación de proteínas heterólogas sin N-glicosilación utilizando la quitinasa Cts1 como transportador. Recientemente, se ha identificado un nuevo factor esencial para la secreción no convencional de Cts1, denominado Jps1.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
PCR Mix
Biochain
PCR-EZ D-PCR MASTER MIX
Bio Basic
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech

Aquí demostramos que Jps1 se secreta de forma no convencional utilizando una fusión con β-glucuronidasa bacteriana como reportero establecido. Curiosamente, el experimento también demuestra que la proteína funciona como un transportador alternativo para proteínas heterólogas, mostrando una actividad reportera aproximadamente 2 veces mayor que la fusión Cts1 en el sobrenadante.
Además, la secreción mediada por Jps1 permitió incluso la exportación eficiente de luciferasa de luciérnaga funcional como nueva diana de secreción, lo que no pudo conseguirse con Cts1. Como aplicación a una diana farmacéutica relevante, se demostró la exportación de nanocuerpos sintéticos bi-específicos funcionales dirigidos contra la proteína spike del SARS-CoV2. El establecimiento de un portador alternativo eficaz constituye, por tanto, una excelente ampliación de la plataforma de secreción existente.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
E01A11128 BlueGene
Goat Cholesterol ELISA ELISA
E01A46041 BlueGene
Mouse Cholesterol ELISA ELISA
E01A19869 BlueGene
Human Cholesterol ELISA ELISA
E01A2368 BlueGene
Sheep Cholesterol ELISA ELISA
E01A98335 BlueGene

Avances recientes en agricultura molecular con plantas monocotiledóneas

La síntesis heteróloga de proteínas o péptidos en sistemas vegetales, denominada agricultura molecular vegetal, es un método práctico y seguro para la producción rentable y a gran escala de biomoléculas terapéuticas. En este contexto, las plantas monocotiledóneas, y especialmente los cereales, se han considerado vehículos atractivos para producir proteínas recombinantes de alto valor. El endospermo, como mayor compartimento de almacenamiento del grano, ofrece un entorno apropiado para la acumulación duradera de proteínas.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
E01A11128 BlueGene
Goat Cholesterol ELISA ELISA
E01A46041 BlueGene

Durante las últimas décadas, se han logrado avances fascinantes en la tecnología de transferencia de genes y la manipulación genética de los cultivos de monocotiledóneas mediante Agrobacterium tumefaciens o la transferencia directa de genes por métodos biolísticos. Recientemente, nuestro grupo ha expresado el péptido humano recombinante catelicidina, biológicamente activo, en granos de cebada mediante un promotor específico del endospermo y ha llevado estas líneas modificadas al cultivo de campo bajo la normativa actual de la UE sobre organismos modificados genéticamente.
Este artículo revisa los avances y estrategias más recientes para la producción de proteínas biofarmacéuticas en monocotiledóneas transgénicas, destacando diversos aspectos implicados en la acumulación de proteínas recombinantes en granos, y discutiendo los cuellos de botella actuales y las perspectivas para la biosíntesis de moléculas terapéuticas utilizando diferentes plataformas de plantas monocotiledóneas.

Protein G Beads (25ml)
Alphabioregen
Stepped Micro Tip (includes Interface Washers)
0-120-0005 Biologics
Tapered Micro Tips
0-120-0007 Biologics
Tapered Micro Tips 5 mm Diameter Tapered Titanium Micro Tip
0-120-0008 Biologics
10 mm Diameter Solid Titanium Tip
0-120-0009 Biologics

El ensamblaje de las subunidades Cas7 de Leptospira sobre el ARNcr maduro de CRISPR-Cas I-B está modulado por iones divalentes

La espiroqueta Leptospira interrogans serovar Copenhageni alberga en su genoma los elementos genéticos del sistema CRISPR-Cas tipo I-B. CRISPR-Cas es un sistema inmune adaptativo mediado por ARN CRISPR (ARNcr) en la mayoría de procariotas contra elementos genéticos móviles (MGEs). Para eliminar los MGEs intrusos, los sistemas CRISPR-Cas tipo I utilizan un complejo Cascade (complejo asociado a CRISPR para la defensa antiviral) compuesto por Cas5, Cas6, Cas7 y Cas8 unidos con un ARNcr. Se sabe esencialmente que Cas7 constituye el principal componente del complejo Cascade. El presente estudio informa de la caracterización bioquímica del Cas7 (LinCas7) del sistema CRISPR-Cas tipo I-B de L. interrogans serovar Copenhageni.
El LinCas7 recombinante puro (rLinCas7) existe como monómero en la solución por cromatografía de exclusión por tamaño. La rLinCas7 demuestra una actividad endoDNasa dependiente de los iones divalentes Mg2+, los iones monovalentes, el pH, la temperatura y el tamaño del sustrato.

Protein G Beads (25ml)
Alphabioregen
Stepped Micro Tip (includes Interface Washers)
0-120-0005 Biologics
Tapered Micro Tips
0-120-0007 Biologics
Tapered Micro Tips 5 mm Diameter Tapered Titanium Micro Tip
0-120-0008 Biologics

El análisis del compuesto ribonucleoproteico (rLinCas7-ARNcr) mediante microscopía electrónica y PAGE nativo demostró que el rLinCas7 podía oligomerizarse en la estructura del ARN CRISPR maduro (ARNcr) en presencia de iones Mg2+.
El compuesto ribonucleoproteico alcanza una forma helicoidal similar a la columna vertebral del complejo Cascade. Sin embargo, en ausencia de iones Mg2+, rLinCas7 actúa como una RNasa. La espectroscopia de fluorescencia reveló una débil interacción (Kd = 26,81 mM) entre rLinCas7 y los iones Mg2+, que conduce a un cambio conformacional global en rLinCas7 que modula la actividad de rLinCas7 sobre sustratos de ADN y ARN. La actividad nucleasa de LinCas7 caracterizada en este estudio contribuye a las divergencias funcionales entre proteínas de la familia Cas7 de diferentes sistemas CRISPR-Cas en diversos organismos.

Fuentes :

  1. Gentaur
  2. NCBI
Protein G Beads (25ml)
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Biologics
Tapered Micro Tips
Biologics
Tapered Micro Tips 5 mm Diameter Tapered Titanium Micro Tip
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